Kategori
Uncategorized

Teknik berdasarkan CRISPR memungkinkan analisis fungsi gen dalam organoid otak

Melalui pendekatan, yang disebut CRISPR -LICHT (di mana LICHT mengacu pada Lineage Tracing to Cell Resolution in Heterogeneous Tissue), peneliti memiliki kesempatan untuk menganalisis secara tiga dimensi dan sistematis, pengaruh 173 gen pada pengaturan ukuran. otak. Hingga saat ini, model studi yang tersedia untuk mempelajari perkembangan otak dan mikrosefali – kultur sel dan model tikus – tidak memungkinkan skrining untuk fungsi beberapa gen.

Dengan menggabungkan CRISPR -LICHT dan organoid otak yang mereproduksi berbagai karakteristik pertumbuhan otak, para peneliti berhasil mengatasi kekurangan model dan mengembangkan metode untuk menyelidiki fungsi otak melalui inaktivasi gen.

Tim tersebut telah menonaktifkan 173 gen kandidat untuk mikrosefali di organoid otak dan menganalisis efek dari kurangnya fungsi masing-masing gen tersebut terhadap kelangsungan hidup atau pertumbuhan. Dengan cara ini, mereka telah menemukan bahwa 25 dari kandidat gen terlibat dalam pengaturan ukuran otak, beberapa di antaranya terkait dengan jalur molekuler yang sebelumnya tidak terkait dengan mikrosefali.

Untuk memverifikasi potensi strategi tersebut, para peneliti telah menganalisis secara lebih rinci peran salah satu kandidat gen, IER3IP1 , yang mengkode protein yang terlibat dalam respons terhadap protein yang gagal melipat dan telah menentukan bahwa kurangnya fungsi protein. mempengaruhi perkembangan organoid melalui efeknya pada aktivitas retikulum endoplasma dan jalur sekresi terkait. Tim juga telah mengidentifikasi obat yang bekerja pada respon seluler terhadap keberadaan protein yang salah lipatan yang melibatkan IER3IP1 dan mereka telah menemukan bahwa obat tersebut menginduksi pemulihan organoid tanpa fungsi untuk gen ini.

Hasil kerja tersebut memberikan alat yang sangat menarik untuk menyelidiki fungsi gen dalam organoid tiga dimensi, baik di otak maupun di jaringan lain. “Kami sangat senang melaporkan bahwa kami sekarang dapat secara rutin melakukan skrining genetik pada sistem organoid yang kompleks,” kata Jürgen Knoblich, peneliti di Institut Bioteknologi Molekuler di Akademi Ilmu Pengetahuan Austria dan Universitas Kedokteran Wina, serta Direktur dari pekerjaan. “Metode ini dapat diterapkan pada model organoid lain dan penyakit apa pun yang dapat memengaruhi pembentukan organ. Ini adalah pendekatan yang benar-benar baru untuk menganalisis gangguan otak dan memiliki potensi luar biasa di masa depan karena dapat diterapkan pada penyakit otak apa pun, bahkan autisme. “

Sumber : http://biotech-spain.com/es/articles/una-t-cnica-basada-en-crispr-permite-analizar-la-funci-n-de-los-genes-en-organoides-de-cerebro/